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MISE EN ÉVIDENCE DE LA COAGULASE LIBRE
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1. INTÉRET, PRINCIPE

1.1. Intérêt
La mise en évidence de la coagulase libre permet la différenciation des espèces du genre Staphylococcus. En effet, seule l'espèce Staphylococcus aureus peut posséder cette enzyme qui joue un rôle important dans le pouvoir pathogène de la bactérie.

1.2. Principe
La coagulase libre est une enzyme capable de coaguler le plasma de lapin, recueilli sur anticoagulant, in vitro.

  COAGULASE  
Fibrinogène + H2O   fibrine +      peptides
  qui se polymérise  

2. TECHNIQUE

Recherche de la coagulase libre

Milieu
et réactif

Technique

Résultats
Incliner le tube.

 

Bouillon coagulase
-digestion papaïnique de viande de boeuf
-hydrolysat de gélatine
-citrate trisodique
-eau distillée

ane contient pas d’éléments capables de coaguler le plasma

 

Réactif
Plasma de lapin oxalaté

J1
-Ensemencer un bouillon coagulase avec quelques gouttes d’une suspension de la souche à tester.
- Incuber 24 heures à 37°C.

J2
-Dans un tube à hémolyse, déposer :

  • 4 gouttes de plasma de lapin oxalaté
  •  4 gouttes de culture en bouillon coagulase, agité

-Placer le tube à hémolyse au bain-marie à 37°C ou à l’étuve à 37°C.

-Observer à partir de 30 min et jusqu’à 24 heures.

 

 

- prise en masse du contenu du tube

-coagulation du plasma

 

- souche coagulase libre +
Orientation vers Staphylococcus aureus.

 

 

- le plasma reste liquide

- absence de coagulation du plasma

- souche coagulase -, en x minutes ou heures
Orientation vers Staphylococcus non aureus.

Causes d'erreur

  • Bouillon insuffisamment ensemencé (J1)
  • Bouillon non agité (J2)
  • Non respect des proportions entre bouillon et plasma (J2)

NB : autre possibilité de recherche : utilisation d’un substrat fluorogène spécifique de cette enzyme (Staphychrom document 4).

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims