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GELOSE AU SANG FRAIS + VANCOMYCINE
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Milieu riche sélectif pour l’isolement des Pasteurella

 

COMPOSITION: en grammes par litre d'eau distillée

Mélange spécial de peptones.........23
Amidon…………………………..1
NaCl…….......................................5                                     
Agar…….......................................10
Sang de mouton…………………50 mL
Vancomycine
                     pH final = 7,3

 

NB: base Columbia dans cette composition, mais possibilité d’utiliser aussi une GTS ou un MH ou une base sang (milieux non glucosés, isotoniques).

 

PREPARATION


1. Liquéfier la base au bain-marie bouillant.
2. Attendre son refroidissement à 45°C (milieu en surfusion).
3.Y ajouter stérilement, à l'aide d'une pipette Pasteur (1 goutte = 0,05 mL), la quantité de sang nécessaire pour obtenir une concentration finale en sang de 5%, soit:

  • Pour 7 mL de milieu de base (petit culot): (7 x 0,05) / 0,05 = 7 gouttes
  • Pour 18 mL de milieu de base (grand culot): (18 x 0,05) / 0,05 = 18 gouttes

F Le sang ne doit pas être sorti au dernier moment du réfrigérateur, sinon il y a prise en masse du milieu au moment de l'addition du sang.
4. Ajouter la vancomycine à raison de 1 mL pour 100 mL de base, soit :

  • Pour 7 mL de milieu de base (petit culot): (1 x 7 / 100) / 0,05 ≈ 2 gouttes
  • Pour 18 mL de milieu de base (grand culot): (1 x 18 / 100) / 0,05 ≈ 4 gouttes

5. Homogénéiser en faisant rouler le tube entre les mains, en évitant la formation de bulles.
6. Couler en boîte de Pétri en évitant la formation de bulles.

Autre possibilité: le sang frais peut être placé directement dans la boîte de Pétri. On coule ensuite le milieu en surfusion dans lequel on a ajouté la vancomycine, et on homogénéise dans la boîte de Pétri.

 

PRINCIPE, INTERET

  • Milieu riche qui permet la culture et l’isolement des bactéries exigeantes (sans besoin de facteurs particuliers).
  • Lecture de l’hémolyse.
  • La vancomycine est un antibiotique qui permet de sélectionner les bactéries du genre Pasteurella.

 

LECTURE


Après 24 heures à 37°C en aérobiose : les Pasteurella donnent de petites colonies, non hémolytiques (colonies muqueuses pour les souches capsulées).

 

 

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims