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GELOSE SCHAEDLER AU SANG FRAIS + KANAMYCINE + VANCOMYCINE
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Milieu riche sélectif pour l’isolement des Bacteroides

 

COMPOSITION: en grammes par litre d'eau distillée

Peptone trypticase-soja..................10
Peptone…………………………..5
Extrait de levure………………….5
Chlorhydrate de cystéine……….0,4
Hémine……………………………0,01
Glucose……………………………5
Tampon TRIS……..........................0,75                                     
Agar.................................................13,5
Sang de mouton………..…………50 mL
Kanamycine……………………....0,1
Vancomycine………………….….0,075
                             pH final = 7,3

 

PREPARATION


1. Liquéfier la base Schaedler au bain-marie bouillant.
2. Attendre son refroidissement à 45°C (milieu en surfusion).
3.Y ajouter stérilement, à l'aide d'une pipette Pasteur (1 goutte = 0,05 mL), la quantité de sang nécessaire pour obtenir une concentration finale en sang de 5%, soit:

  • Pour 7 mL de gélose Schaedler (petit culot): (7 x 0,05) / 0,05 = 7 gouttes
  • Pour 18 mL de gélose Schaedler (grand culot): (18 x 0,05) / 0,05 = 18 gouttes

F Le sang ne doit pas être sorti au dernier moment du réfrigérateur, sinon il y a prise en masse du milieu au moment de l'addition du sang.
4. Ajouter le mélange kanamycine-vancomycine à raison de 1 mL pour 100mL de gélose Schaedler, soit :

  • Pour 7 mL de gélose Schaedler (petit culot): (1 x 7 /100) / 0,05 ≈ 2 gouttes
  • Pour 18 mL de gélose Schaedler (grand culot): (1 x 18 / 100) / 0,05 ≈ 4 gouttes

5. Homogénéiser en faisant rouler le tube entre les mains, en évitant la formation de bulles.
6. Couler en boîte de Pétri en évitant la formation de bulles.
Autre possibilité: le sang frais peut être placé directement dans la boîte de Pétri. On coule ensuite le milieu en surfusion dans lequel on a ajouté le mélange d’antibiotiques et on homogénéise dans la boîte de Pétri.

 

PRINCIPE, INTERET

  • Milieu riche (hémine, sang de mouton), contenant des substances réductrices (glucose, chlorhydrate de cystéine) qui permet la culture et l’isolement des bactéries anaérobies strictes.
  • La kanamycine et la vancomycine sont des antibiotiques qui inhibent la plupart des bactéries à Gram positif, les entérobactéries et certaines bactéries anaérobies strictes (Fusobacterium, Clostridium). Ils sélectionnent les bactéries anaérobies strictes du genre Bacteroides.

 

LECTURE


Après 48 heures d’incubation en anaérobiose : le genre Bacteroides donne des colonies de 2 à 3 mm de diamètre, régulières et translucides, non hémolytiques.

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims