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GELOSE AU SANG FRAIS + MELANGE CAMPYLOSEL (ANTIBIOTIQUES)
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Milieu riche sélectif pour l’isolement des Campylobacter

COMPOSITION: en grammes par litre d'eau distillée

Mélange spécial de peptones.........23
Amidon…………………………..1
NaCl…….......................................5                                     
Agar…….......................................10
Sang de mouton…………………50 mL
Mélange sélectif (ATB)………....10 mL
                     pH final = 7,3

 

NB: base Columbia dans cette composition, mais possibilité d’utiliser aussi une GTS ou un MH ou une base sang (milieux non glucosés, isotoniques).
Mélange sélectif : céfopérazone, colistine, vancomycine, amphotéricine B.

 

PREPARATION
1. Liquéfier la base au bain-marie bouillant.
2. Attendre son refroidissement à 45°C (milieu en surfusion).
3.Y ajouter stérilement, à l'aide d'une pipette Pasteur (1 goutte = 0,05 mL), la quantité de sang nécessaire pour obtenir une concentration finale en sang de 5%, soit:

  • Pour 7 mL de milieu de base (petit culot): (7 x 0,05) / 0,05 = 7 gouttes
  • Pour 18 mL de milieu de base (grand culot): (18 x 0,05) / 0,05 = 18 gouttes

F Le sang ne doit pas être sorti au dernier moment du réfrigérateur, sinon il y a prise en masse du milieu au moment de l'addition du sang.
4. Ajouter le mélange sélectif Campylosel à raison de 1 mL pour 100 mL de base, soit :

  • Pour 7 mL de milieu de base (petit culot): (1 x 7 / 100) / 0,05 ≈ 2 gouttes
  • Pour 18 mL de milieu de base (grand culot): (1 x 18 / 100) / 0,05 ≈ 4 gouttes

5. Homogénéiser en faisant rouler le tube entre les mains, en évitant la formation de bulles.
6. Couler en boîte de Pétri en évitant la formation de bulles.

Autre possibilité: le sang frais peut être placé directement dans la boîte de Pétri. On coule ensuite le milieu en surfusion dans lequel on a ajouté le mélange sélectif, et on homogénéise dans la boîte de Pétri.

 

PRINCIPE, INTERET

  • Milieu riche qui permet la culture et l’isolement des bactéries exigeantes (sans besoin de facteurs particuliers).
  • Lecture de l’hémolyse
  • Le mélange sélectif permet de sélectionner les bactéries du genre Campylobacter :
  • La céfopérazone permet d’inhiber la plupart des Pseudomonas ainsi que certaines entérobactéries fréquemment résistantes aux antibiotiques (Proteus, Serratia, Citrobacter).
  • La colistine est active sur de nombreuses bactéries à Gram négatif.
  • La vancomycine est active sur de nombreuses bactéries à Gram positif.
  • L’amphotéricine B inhibe les levures.

 

LECTURE
Après 48 à 72 heures à 37°C en micro-aérophilie : les colonies de Campylobacter sont petites, grisâtres, non hémolytiques et s’étalent parfois le long des stries d’ensemencement.

 

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims